中谱蓝 SEC 使用说明书

概述
中谱蓝 SEC 是一款全系列的高性能体积排阻色谱柱，根据动态体积原理，用于众多不同的药物及生物大分子的色谱分离。该产品系中谱分析利用自主创新技术开发的高性能 SEC 体积排阻分离介质，以单分散多孔硅胶为基质，孔道结构经过特殊设计，并在硅胶表面涂覆中性亲水层，将分析物与固定相之间的相互作用降到最低。

特性
1.单分散硅胶基球，分辨效率高、机械强度高
2.与样品极低的相互作用力，体积排阻性能优异
3.柱流失低，能很好地与质谱匹配使用
4.产品系列丰富，提供不同孔径参数的产品，可满足各类蛋白质、多肽、寡核苷酸和多糖等众多生物大分子的分离和分析需求

产品信息

操作指南
· 请按照上述的操作参数规范操作。
· 请按照色谱柱标签上标记箭头的方向使用。
· 请小心保管，不要让柱子受到任何物理冲击。
· 避免任何情况下的压力激增。
· 流动相和样品使用前应使用 0.45 μm 或更小孔径的滤膜过滤以去除细菌和其他颗粒，可在流动相中加入少量叠氮化钠（0.05%）。
· 防止气泡的混入，否则会降低色谱柱的性能。
· 首次使用时，用纯水以推荐使用的流速冲洗色谱柱至少 5倍柱体积（2 小时左右），再用流动相冲洗色谱柱至基线平衡。

色谱柱的钝化
新出厂的色谱柱可能存在少量可吸附蛋白位点（如色谱柱的筛板），建议在使用前先注射足量的蛋白到色谱柱上来屏蔽这些吸附位点，以保证结果的可靠性与重现性。

常用流动相的配制
SEC 色谱柱的流动相一般为水或磷酸盐缓冲液，必要时可以添加少量的有机溶剂（20%以下），以获得更好的分离效果和峰型，推荐使用以下缓冲溶液作为流动相：
150 mM 磷酸盐缓冲液（pH 6.8）：称取 1000 ± 1 g 去离子水，加入 8.99 ± 0.1 g 无水磷酸二氢钠和 10.65 ± 0.1 g 无水磷酸氢二钠，溶解、混匀后过滤即得。
50 mM 磷酸盐缓冲液（pH 6.8），含 300 mM 氯化钠：称取1000 ± 1 g 去离子水，加入 3.0 ± 0.1 g 无水磷酸二氢钠、3.55± 0.1 g 无水磷酸氢二钠和 17.54 ± 0.1 g 氯化钠，溶解、混匀后过滤即得。
50 mM 磷酸盐缓冲液（pH 6.8），含 300 mM 氯化钠，10%乙腈：称取 1000 ± 1 g 去离子水，加入 3.0 ± 0.1 g 无水磷酸二氢钠、3.55 ± 0.1 g 无水磷酸氢二钠和 17.54 ± 0.1 g 氯化钠，溶解、混匀，称取上述溶液 900 ± 1 g，加入 79 ± 0.5 g 乙腈，混匀后过滤即得。

色谱柱的维护与再生
· 离子性吸附：通过提高清洗液的盐浓度（0.25 M）或使用酸性水溶液，如磷酸盐缓冲液（pH 2.5）清洗。
· 疏水性吸附：在清洗液中添加甲醇、乙腈等有机溶剂（15 %左右）以低流速清洗，在清洗前建议用水过渡防止缓冲液内盐的析出。
· 氢键吸附 ：配置 6 M 的尿素或 0.2 %的中性表面活性剂（Triton、Tween、Brij 等）清洗，再用水充分清洗柱内的尿素及表面活性剂残留。
· 经常替换溶剂可能会损伤色谱柱。因此，应仅在必要的情况下清洗柱子。一般来说，清洗量为 5-10 个柱体积。
· 清洗时的柱压、流速以及清洗液的 pH 值应在推荐的操作参数范围内，以避免损坏色谱柱。

注意：不建议使用者擅自打开色谱柱。

色谱柱的保存
不使用时，请确保色谱柱塞好柱塞，防止柱内溶剂挥发导致盐的析出。
· 短期保存（5 天内）：确保色谱柱塞好柱塞，可在中或弱酸性缓冲盐溶液（pH 5-7）中保存
· 长期保存：如较长时间不使用色谱柱，为避免柱内滋生微生物或腐蚀不锈钢柱管（如氯离子），建议在 10-20 %乙醇（甲醇或乙腈）水溶液中或含有 0.05 %叠氮化钠的缓冲溶液中，必要时可冷藏保存（5-10 ℃）。

注意：频繁置换柱内溶剂会导致色谱柱寿命缩短。