支持与应用
【应用分享】阿胶中有效成分—氨基酸的测定
发布时间：
2022-01-24
简介
阿胶，中药名。为马科驴属动物驴EquusasinusL.的皮，经漂泡去毛后熬制而成的胶块。具有补血，滋阴，润肺，止血的功效。主治血虚诸证，出血证，肺阴虚燥咳，热病伤阴，心烦失眠，阴虚风动，手足瘈疭。
阿胶多由骨胶原组成，经水解后得到多种氨基酸，如赖氨酸、精氨酸、组氨酸、胱氨酸、色氨酸、羟脯氨酸、天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸等。本工作站参考2020版《中国药典》的方法对阿胶进行有效成分的测定。
分析条件
注：参考《中国药典2020版》
色谱柱：中谱红RD-C18
规格：4.6×250mm5μm
波长：254nm
进样量：5μL柱温：43℃
流动相：以乙腈-0.1mol/L醋酸钠溶液（用醋酸调节pH值至6.5）（7:93）为流动相A，以乙腈-水（4:1）为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；
溶液配置
对照品溶液的制备取L-羟脯氨酸对照品、甘氨酸对照品、丙氨酸对照品、L-脯氨酸对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml分别含L-羟脯氨酸80μg、甘氨酸0.16mg、丙氨酸70μg、L-脯氨酸0.12mg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品粗粉约0.25g，精密称定，置25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液20ml，超声处理（功率500W，频率40kHz）30分钟，放冷，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀。精密量取2ml，置5ml安瓿中，加盐酸2ml，150℃水解1小时，放冷，移至蒸发皿中，用水10ml分次洗涤，洗液并入蒸发皿中，蒸干，残渣加0.1mol/L盐酸溶液溶解，转移至25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，即得。
衍生化处理精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各5ml，分别置25ml量瓶中，各加0.1mol/L异硫氢酸苯酯（PITC）的乙腈溶液2.5ml，lmol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml，摇匀，室温放置1小时后，加50%乙腈至刻度，摇匀。取10ml，加正己烷10ml，振摇，放置10分钟，取下层溶液，滤过，取续滤液，即得。
图谱分享
对照溶液图谱：
样品溶液图谱：
实验结果
按《中国药典2020版》的方法采用中谱红RD-C18测定阿胶中L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸的含量，其L-羟脯氨酸理论塔板数＞4000，四种氨基酸且皆具有良好的峰形以及分离度。
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