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【应用分享】原料乳与乳制品中三聚氰胺的检测
发布时间：
2024-05-11
三聚氰胺，也称为密胺或蛋白精，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，化学式为C3H6N6。它通常以白色单斜晶体的形式存在，几乎无味，不溶于水，但微溶于一些有机溶剂。因其分子中含氮量高，曾被不法商人非法添加到食品中，以提高食品检测中的蛋白质含量指标。三聚氰胺的添加是2008年中国奶粉污染事件的主要原因，这次事件导致数千名婴幼儿受害，引起全球对乳制品安全的关注。这一事件促使中国乳业进行了一系列的改革，加强了奶牛养殖模式的监管，改变了牛乳的检测标准。
01 适用范围
适用于原料乳、乳制品及乳制品中三聚氰胺的含量测定（本实验采用牛奶/酸奶为样品）
参考标准：《GB/T 22388-2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》。
02 溶液配制
1) 标准贮备液：准确称取三聚氰胺标准品10 mg，用50%甲醇水溶解并定容至10 mL，该浓度为1 mg/mL；
2) 标准工作液：准确移取1 mL标准贮备液，用50%甲醇水稀释并定容至10 mL，该浓度为100 μg/mL；
3) 1%三氟乙酸溶液：10 g三氟乙酸，用水稀释并定容至1 L；
4) 5%氨水-甲醇溶液：移取5 mL氨水，加入至95 mL甲醇中，混匀；
5) 离子对试剂：2.10 g柠檬酸和2.16 g辛烷磺酸钠，加入980 mL水溶解，用NaOH溶液调节pH至3.0后，再用水定容至1 L。
03 提取步骤
1) 称取2 g样品，加入15 mL 1%三氟乙酸溶液，5 mL乙腈，涡旋1 min，超声10 min，离心10 min（8000 r/min）；
2) 上清液经1%三氟乙酸溶液润湿后的滤纸（定性滤纸）过滤，用三氟乙酸溶液定容至25 mL，再次离心10 min（8000 r/min）；
3) 准确移取5 mL上清液，加入5 mL水，混匀待净化。
04 SPE净化步骤
SPE柱：SPE-MCX
规格：60 mg/3 mL
活化：3 mL 甲醇、5 mL 水，弃去；
上样：待净化液全部上样，控制流速，不宜过快，弃去；
淋洗：分别用 3 mL水，3 mL甲醇淋洗，弃去；
洗脱：用6 mL 5%氨水甲醇洗脱，收集于15 mL离心管中，抽干；
浓缩：在50 ℃水浴下氮气吹干，用流动相复溶（离子对试剂:乙腈=9:1），定容至1 mL，过0.22 μm有机滤头，待检测。
05 注意事项
1) 加标水平：2 g样中加入0.02 mL 1000 μg/mL，最后定容至1 mL，该加标水平为 10 mg/kg，机读数为4 μg/mL。
2) 滤纸过滤前一定要用1%三氟乙酸溶液完全润湿。
3) 样品和标品都要用当天的流动相复溶。
06 色谱条件
色谱柱：ZPC-C18，4.6*250 mm，5 μm，货号：20228-0546025
流动相：离子对试剂:乙腈=9:1 （混匀，走单泵）
流速：1.0 mL/min
柱温：40 ℃
进样量：20 μL
检测波长：240 nm
07 色谱结果
图 1 三聚氰胺标准 4 μg/mL图谱
表 1 三聚氰胺标准 4 μg/mL色谱峰结果
图 2 牛奶样品图谱
图 3 牛奶样加标10 mg/kg图谱
图 4 酸奶样品图谱
图 5 酸奶样加标10 mg/kg图谱
08 加标回收率结
表 2 牛奶、酸奶基质中三聚氰胺回收率
09 产品信息
