支持与应用
【应用分享】动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定
发布时间：
2024-09-13
 |
 |
β-受体激动剂
β-受体是一种肾上腺受体，其与相应递质结合导致心脏兴奋、血管和支气管扩张及代谢变化（糖酵解和脂肪分解）。β-受体激动剂的全称为肾上腺素β受体激动剂，可分为非选择性的β-受体激动剂（如异丙肾上腺素）、选择性心脏β1-受体激动剂（如多巴酚丁胺）与选择性β2-受体激动剂（如沙丁胺醇）三大类。
一些β2-受体激动剂可以促进动物体内蛋白质合成，加速脂肪的转化和分解。因此，常被不法分子添加入饲料中以提高瘦肉率，俗称“瘦肉精”。当人食用了瘦肉精含量过多的肉类时，会产生异常生理反应的中毒现象。因此，对动物源性食品及其他食品中的β-受体进行含量检测是很有必要的。
本次实验参考《GB 31658.22-2022 食品安全国家标准 动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，使用RD-Phenyl 3 μm 2.1×100 mm色谱柱测定猪肉、牛肉与猪肝中β-受体激动剂的残留量。
1.溶液配制
（1）乙酸铵溶液(0.2 moL/L)：称取15.4 g乙酸铵（精确至0.001 g），加水溶解并定容至1000 mL，用乙酸调pH至5.2。
（2）高氯酸溶液(0.1 moL/L)：移取高氯酸8.7mL，用水稀释至1000 mL。
（3）氢氧化钠溶液(10 moL/L)：称取40 g氢氧化钠，用适量水溶解，冷却后，用水稀释至1000 mL。
（4）2%甲酸水溶液：移取甲酸2 mL，用水稀释定容至100 mL。
（5）5%氨化甲醇溶液：移取5 mL氨水置于100 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。
（6）0.1%甲酸乙腈溶液：移取甲酸2 mL，用乙腈稀释定容至100 mL。
（7）0.1%甲酸溶液：移取甲酸2 mL，用乙腈稀释定容至100 mL。
（8）甲醇-0.1%甲酸溶液(10+90，V/V)：移取甲醇10 mL和0.1%甲酸溶液90 mL，混匀。
（9）混合标准工作液(10 mg/L)：精确移取100 μL 1 mg/mL的混合标准储备液至10 mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，-18 ℃保存6个月。
（10）混合内标工作液(10 mg/L)：精确移取100 μL 1 mg/mL的混合内标储备液至10 mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，-18 ℃保存6个月。
2.酶解与提取
称取称取试样2 g(准确至0.05 g)于50 mL离心管内，加0.22 mol/L乙酸铵缓冲溶液6 mL，β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶40 μL，涡旋混匀，37 ℃避光水浴震荡16 h，放置至室温，备用。
3.萃取、净化与浓缩
取备用液，加100 ng/mL内标工作液100 μL，涡旋混匀，8000 r/min离心8 min，取上清液加0.1 mol/L高氯酸溶液5 mL，涡旋混匀，用高氯酸调pH至1.0±0.2，8000 r/min离心8 min后，将上清液用每升10mol/L氢氧化钠溶液调pH至10±0.5。加乙酸乙酯15 mL，中速振荡5 min，5000 r/min离心5 min，取上层有机相，下层水相中加入叔丁基甲醚10 mL，中速振荡5 min，5000 r/min离心5 min，取上层有机相，合并，50 ℃下氮气吹干，用2%甲酸溶液5 mL溶解，备用。
4.净化
SPE柱：MCX 60 mg/3 mL
活化：3 mL甲醇，3 mL 2%甲酸溶液，弃去；
上样：将备用液加入柱中；
淋洗：用3 mL 2%甲酸溶液，3 mL甲醇弃去，抽干；
洗脱：3 mL 5%氨化甲醇洗脱，收集于15 mL离心管中；
浓缩：将收集液在50℃氮气吹干
复溶：甲醇-0.1%甲酸溶液（10+90，V/V)0.5 mL 复溶，过0.22 μm微孔滤膜，HPLC-MS/MS检测
5.加标
加标水平：0.01 mL 0.1 ppm混标加到2 g样品，加标水平为0.5 μg/kg，最终机度数为 2 ng/mL 。
加标水平：0.025 mL 0.1 ppm混标加到2 g样品，加标水平为1.25 μg/kg，最终机度数为5 ng/mL 。
加标水平：0.02 mL 1 ppm混标加到2 g样品，加标水平为10 μg/kg，最终机度数为 40 ng/mL 。
6.色谱条件
（1） UPLC条件
色谱柱：RD-Phenyl 3 μm 2.1×100 mm
流动相：A—0.1%甲酸水溶液 B—0.1%甲酸乙腈溶液
柱温：30 ℃；
流速：0.3 mL/min；
进样体积：2 µL
梯度洗脱程序：见表1
表1 UPLC梯度洗脱程序
（2）质谱条件
离子源：电喷雾离子源（ESI）；
扫描方式：正离子扫描；
检测方式：多反应监测（MRM）模式；
离子喷雾电压：5500 V；
离子源温度：500 ℃；
气帘气（CUR）：10 psi；
雾化气（GS1）：55 psi；
辅助气（GS2）：50 psi。
液质仪器型号：AB Sciex TRIPLE QUAD 4500
其他质谱参数见表2
表2 多反应监测模式（MRM）参数
7.结果
图 1 β-受体激动剂标准品2 ng/mL图谱
图 2 β-受体激动剂标准品5 ng/mL图谱
图 3 β-受体激动剂标准品50 ng/mL图谱
图 4 猪肉样图谱
图 5 猪肉样加标0.5 μg/kg 图谱
图 6 猪肉样加标1.25 μg/kg 图谱
图 7 猪肉样加标10 μg/kg 图谱
图 8 牛肉样图谱
图 9 牛肉样加标0.5 μg/kg 图谱
图 10 牛肉样加标1.25 μg/kg 图谱
图 11 牛肉样加标10 μg/kg 图谱
图 12 猪肝样图谱
图 13 猪肝样加标0.5 μg/kg 图谱
图 14 猪肝样加标1.25 μg/kg 图谱
图 15 猪肝样加标10 μg/kg 图谱
表 3 加标回收率表
8.产品信息 RD-Phenyl
采用独特的键合技术在硅胶上键合苯基而成的色谱柱。该色谱柱具有高的表面覆盖率和完全双封尾的特性，与直链烷烃键合而成的反相色谱柱相比，苯基柱具有不同的选择性，或者可以说是互补的选择性，对芳香族化合物、极性化合物和难以分离的药物具有优良的分离效果。
订货信息：
SPE-MCX
混合型阳离子（MCX）交换固相萃取小柱，对碱性化合物具有高的选择性和灵敏度，基质基质为聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物。基质指标：离子交换和反相，而且保留作用发生在一种洁净、稳定、高表面积、pH 0-14范围内稳定的有机共聚物上。可用来分离塑料制品，食品或生物基质（如血浆，尿液,胆汁及组织匀浆）中的碱性化合物，如苯丙胺，奶粉及扑尔敏，苯环利定等。
订货信息：
