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干货分享—流动相含缓冲液时如何维护色谱柱
发布时间：
2020-03-18
（一）液相分析中常用缓冲盐的原因
反相液相色谱分析中，流动相的PH值一般在2.5-7之间，当被分析物在反相条件下可离解，或样品的PH值在2.5-7之外时，就需要由缓冲盐配制的缓冲液体系。在反相条件下可离解的化合物一般都有氨基和羧基，他们的Pka在1-11之间，选择正确的缓冲液PH值可保证可离解的官能团以一种形式存在，离子形式或中性化合物的形式。如果样品的PH值对柱子有伤害，则缓冲溶液可使其变温和从而减小其危害。
对于分析结果来说，不恰当的PH值可能导致不对称峰，宽峰，分裂峰或肩峰，而尖锐的，对称的峰是定量分析中获得低的检测限以，两次分析之间较低的相对标准偏差(RSD)和保留时间的高重现性的前提。正确选择缓冲溶液在反相液相色谱方法中对于优化尖峰，检出限，以及获得稳定的保留时间十分重要。但是，如果操作过程不当，会对色谱柱造成严重伤害！
所以，缓冲盐的使用，有利也有弊。
（二）、缓冲盐使用不当带来的后果
缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响。
柱压升高
原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高。
柱效下降
原因有二：
1.有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降；
2.缓冲盐凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。
保留时间发生变化
原因：如果没有冲洗干净就进行下次进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化。
（三）色谱柱维护
色谱柱内含有的流动相中含有缓冲盐时，大的原则是：使用前要过渡，使用后要清洗（清洗包括两个步骤，一个步骤是用来清洗缓冲盐，另一个步骤是用来清洗强保留物质的），具体请按如下方式保养色谱柱：
1、使用前的过渡：
用乙腈：水＝10：90（如果是甲醇体系则用甲醇：水＝10：90）以1ml/min流速过渡30min（目的是防止缓冲盐在进入柱子时析出）；
理由：缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。
用含缓冲盐的（特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时）流动相进行分析时，如果分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出，沉积下来，这将可能导致对色谱柱的损害。
2、一天分析完成后，即使用后的清洗：
1）用乙腈：水＝10：90（或甲醇：水＝10：90）以1ml/min流速反向冲洗45min（目的是洗去缓冲盐，防止缓冲盐在色谱柱内存留引起使用寿命下降）；
2）再用乙腈：水＝90：10（或甲醇：水＝90：10）1ml/min流速反向冲洗45min，（目的是洗去分析过程中积累的强保留物质，防止强保留物质在色谱柱内进一步积累，影响以后的分析，也防止强保留物质的积累导致的柱压升高），然后色谱柱保存在乙腈：水＝90：10（或甲醇：水＝90：10）中；
3、如果做完一种化合物，紧接着要做另外一种化合物，由于流动相等条件不同，则请先按步骤2清洗色谱柱，再使用色谱柱；要是接下来做的样品的流动相里也含有缓冲盐，也请在步骤2清洗过后再按步骤1的方式来过渡。
1）乙腈：水＝10：90或甲醇：水＝10：90容易长菌，温度越高越容易长菌，实验表明，在28度条件下保存至第5天时发现长菌，不宜多配。