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体积排阻色谱的分类与选择
发布时间：
2025-02-14
在日常实验过程中我们可能听过GPC（凝胶渗透色谱）、GFC（凝胶过滤色谱）和SEC（体积排阻色谱），它们都是常用的液相色谱方法，但是三者间具体有什么区别呢？
其实GPC、GFC、SEC本质上是同一种色谱技术，区别于常规HPLC分析依靠色谱柱填料发生相互作用（吸附、分配等）分离组分，它们通过样品分子大小或流体动力学体积的差异来分离样品中的不同组分。其填料具有一定范围的孔径尺寸，且表面一般有孔隙，体积较大的分子无法进入较小的孔隙，较小的分子将进入大部分孔隙，故保留时间更长。
我们可以认为GPC、GFC是SEC的具体应用形式。SEC按流动相的不同分为两类：以有机溶剂为流动相者称为凝胶渗透层析（GPC），以水溶液为流动相者称为凝胶过滤层析（GFC）。GPC和GFC二者的主要区别在于流动相的选择和应用领域。
1 定义和原理
（1）GPC（凝胶渗透色谱）：
GPC是SEC的一种具体应用形式，主要用于分析聚合物的分子量分布。
（2）GFC（凝胶过滤色谱）：
GFC也是SEC的一种具体应用形式，主要用于分离水溶性的生物大分子。
2 填料类型
（1）GPC（凝胶渗透色谱）：
常用的色谱柱填料是交联聚苯乙烯凝胶。
（2）GFC（凝胶过滤色谱）：
常用的色谱柱填料是交联葡聚糖或聚丙烯酰胺。
3 流动相选择
（1）GPC（凝胶渗透色谱）：
根据样品的溶解性和分子量范围，一般使用有机溶剂作为流动相，如四氢呋喃（THF）、氯仿、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）等。DMF适用于分子量3000-100万的样品，而THF适用于分子量500-200万的样品。
（2）GFC（凝胶过滤色谱）：
一般使用水溶液作为流动相，如去离子水、缓冲溶液或含有少量有机溶剂（如甲醇）的水溶液。少量抑制剂（如0.2%的NaN₃）或有机溶剂（如甲醇）可以防止细菌滋生。
4 应用领域
（1）GPC（凝胶渗透色谱）：
主要用于分析聚合物的分子量及其分布，如聚乙烯、聚氯乙烯等。
（2）GFC（凝胶过滤色谱）：
主要用于分离和纯化水溶性的生物大分子，如蛋白质、多糖、核酸等。
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