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【干货分享】液相色谱仪常见故障及解决方法
发布时间：
2025-11-21
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液相色谱仪常见故障及解决方法
液相色谱仪是实验室常用的仪器设备之一，在使用过程中，难免会出现这样或那样的问题。今天小编就液相色谱仪常出现的“压力异常”、“峰形异常”、“基线问题”和“时间波动”等情况开始“敲黑板”啦。
压力过高
原因
a. 色谱柱堵塞(流动相未过滤导致微粒进入、样品未预处理导致不可逆吸附、细菌生长堵塞填料间隙)；
b. 筛板堵塞(流动相中的微粒或样品中的杂质堵住筛板)；
c. 系统流路堵塞。
解决方法
a. 流动相和样品均用0.45μm(或更细)滤膜过滤；
b. 用正向冲洗(流动相方向)色谱柱(如用90%水+10%乙腈冲洗盐类堵塞，用纯乙腈冲洗有机污染物);
c. 若正向冲洗无效，可反向冲洗(需确认色谱柱是否允许反向使用);
d. 若筛板堵塞严重则需更换色谱柱筛板。
压力过低或无压力
原因
a. 系统泄漏(接头松动、密封件(如O型圈)损坏、色谱柱两端螺帽未拧紧);
b.泵未吸液(流动相液面过低、泵内有气泡、泵密封件损坏);
c. 流动相黏度太低(如纯乙腈，柱压本身较低，但需确认是否符合方法要求)；
d. 泵单向阀故障；
e. 排空阀未关闭。
解决方法
a. 检查所有接头(如色谱柱两端、泵出口、进样器)，拧紧松动的螺帽;
b. 更换损坏的密封件;
c. 排除泵内气泡(打开 purge 阀，用3-5 mL/min 流速冲洗，或用针筒抽取泵内气泡);补充流动相至合适液面(一般高于泵吸液口10cm以上)；
d. 更换或者清洗单向阀；
e. 确保排空阀处于关闭状态。
峰拖尾
原因
a. 色谱柱污染(填料表面吸附污染物，导致样品组分保留时间延长);
b. 筛板堵塞(样品无法均匀进入色谱柱，导致峰形不对称);
c. 流动相pH不合适(如反相柱中，pH过高会导致硅胶基质溶解，过低会导致酸性组分解离不完全);
d. 样品过载(进样量超过色谱柱容量，导致峰形拖尾)。
解决方法
a. 用强溶剂(如纯甲醇、乙腈)冲洗色谱柱(去除污染物);
b. 若筛板堵塞则更换筛板;
c. 调整流动相pH(如反相柱一般用pH 2-7的缓冲液);
d. 减少进样量或稀释样品。
峰分叉
原因
a. 色谱柱柱头塌陷(填料被流动相冲出，导致柱头不平);
b. 样品中有强保留杂质(杂质吸附在柱头，导致样品组分分离为两个峰);
c. 进样针污染(样品中带入杂质)；
d. 样品溶剂与流动相不兼容。
解决方法
a. 更换色谱柱(柱头塌陷无法修复);
b. 优化样品前处理(如固相萃取去除强保留杂质);
c. 清洗进样针(用甲醇或丙酮超声清洗);
d. 尽量使用初始流动相溶解样品。
峰展宽
原因
a. 柱效下降(填料颗粒破碎、柱内死体积增加);
b. 流动相流速不合适(流速过快导致传质阻力增加，流速过慢导致纵向扩散加剧);
c. 进样量过大(超过色谱柱容量，导致峰形展宽);
d. 柱温过低(流动相黏度增加，传质效率下降)。
解决方法
a. 更换新色谱柱(柱效下降至理论塔板数低于初始值的50%时);
b. 校准流速(用流量计测量泵的实际流速);
c. 减少进样量;
d. 提高柱温(如从25°C升至30℃，降低流动相黏度)。
基线漂移--缓慢上升或下降
原因
a. 流动相污染(如溶剂不纯、含有挥发性杂质);
b. 检测器不稳定(如紫外灯寿命到期，发光强度下降);
c. 柱温变化(柱温箱未恒温，导致流动相黏度变化);
d. 色谱柱污染(污染物缓慢洗脱，导致基线漂移)或未平衡。
解决方法
a. 使用HPLC级溶剂(避免杂质干扰)，流动相配制后需超声脱气;
b. 更换检测器灯(如紫外灯使用超过2000小时，需更换);
c. 检查柱温箱是否恒温(一般波动范围<+0.5℃);
d. 冲洗色谱柱(去除污染物)，更换流动相体系或新柱使用时，必须用足够长时间和体积的流动相平衡色谱柱，直至基线平稳（通常需要10-20倍柱体积）。
基线噪声大--高频振动
原因
a. 流动相中有气泡(气泡通过检测器时，导致光吸收变化产生噪音）；
b. 检测器污染(流通池中有杂质，导致光散射);
c. 电源不稳定(电压波动导致检测器信号波动);
d. 流动相黏度高(如含有高浓度缓冲液，导致泵压力波动)。
解决方法
a. 流动相超声脱气(15-20分钟)或用氦气吹扫脱气;
b. 清洗检测器流通池(用甲醇或10%硝酸超声清洗);
c. 使用稳压电源(避免电压波动);
d. 降低流动相黏度(如用乙腈代替甲醇，或稀释缓冲液浓度)。
原因
a. 流动相组成变化(如有机相(甲醇/乙腈)挥发;流动相比例变化；pH值变化);
b. 柱温变化(柱温升高，保留时间缩短；柱温降低，保留时间延长);
c. 色谱柱污染或固定相流失/降解;
d. 流速变化(泵的实际流速与设置值偏差大，导致保留时间变化)。
解决方法
a. 密封流动相瓶（用 Parafilm 包裹瓶口，防止有机相挥发；勤换流动相）;
b. 检查柱温箱是否恒温（如柱温波动≤±0.5℃）；
c. 冲洗色谱柱；色谱柱在规定的pH范围和温度使用；
d. 校准泵的流速（用流量计测量实际流速，偏差超过5%需维修泵）。
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