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HPLC系统进气泡：快速诊断与有效解决
发布时间：
2025-01-17
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HPLC中的气泡
高效液相色谱仪中出现气泡是一个常见的问题，可能会导致色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降。气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线不稳定，影响峰形与峰面积。接下来的内容我们将介绍常见的HPLC仪器中产生气泡的原因及解决方法。
溶剂混合导致的气泡
故障原因：溶剂混合时，由于液体热力学体积的变化，会产生气泡。混合时放热或者吸热易产生气泡，比如：甲醇和水混合属于放热，乙腈和水混合属于吸热。摇晃流动相瓶可以看到许多小气泡存在液体中。若流动相中加入了离子对试剂也可能产生气泡。
解决方法：对溶剂过滤、超声脱气（常用），尤其是乙腈和水混合后，超声脱气时间要长一些，也可以通过安装在线脱气机等方法处理。若含离子对试剂的流动相通过超声难以去除气泡，可将流动相静置过夜。处理好的液体在使用过程中应该保持室内温度恒定且尽快使用。
滤头污染导致的气泡
故障原因：溶剂滤头污染，导致泵在吸液过程中吸力不均匀而强制吸液从而产生微小的真空气泡。高速排废时可以观察到气泡源源不断地从滤头出产生，无论排废多长时间都无法冲干净管壁内的气泡。
解决方法：小心拆下泵头，若滤头不可进行超声，则用5%-10%的稀硝酸浸泡过夜，再用纯水浸泡几次；若滤头可超声，则用5%-10%的稀硝酸或异丙醇超声处理至少半小时，再用清水洗掉酸的残留，最后重新安装即可。建议定期在稀硝酸溶液中超声、清洁过滤器，避免滤头堵塞。
进样导致的气泡
故障原因：手动进样器吸样时带到进样针中气泡。
解决方法：在吸样时，注意排出进样针里的空气，可将进样针头垂直向上，用手指垫上滤纸摁住针头处往上推，气泡上去后排出即可。
色谱柱的气泡
故障原因：色谱柱进气泡。
解决方法：用纯甲醇低流速（0.2-0.3mL/min）长时间冲洗反相色谱柱，随后可逐步加大流速，最大加到1mL/min，直至色谱柱压力稳定。或者更换色谱柱。
流通池（检测器）中的气泡
故障原因：流通池易积存气泡，其对基线影响较大。流动相流入色谱柱后，压力越来越小，微小气泡将逐渐长大，而流通池截面积相对较大，则气泡在池内易长大。在无外压的情况下，很难缩小到管路内径以下流出流通池，从而存留在池内，导致基线不稳定。
管路连接不紧密/泵密封不良导致的气泡
故障原因：仪器的各个管路之间的连接部位如果存在松动，或者泵的密封件损坏或老化，会导致空气从密封处进入泵体，进而进入管路。
解决方法：仔细检查仪器各管路的连接部位，确保连接紧密，无松动。若泵密封件损坏或老化，需及时更换新的密封件，以保证泵的正常工作。
流动相走空产生的气泡
故障原因：未能及时补充或更换流动相，导致流动相被泵抽干，空气进入管路，进而产生气泡。
解决方法：将流动相重新充满储液瓶，打开排液阀，以较大流速冲洗管路和泵体，将气泡排出。也可使用仪器的排气功能，按照操作手册的步骤进行排气操作。对于色谱柱中的气泡，可以采用低流速长时间冲洗的方法，将气泡逐渐赶出。
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