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【应用分享】动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定
发布时间：
2024-09-13
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β-受体激动剂
β-受体是一种肾上腺受体，其与相应递质结合导致心脏兴奋、血管和支气管扩张及代谢变化（糖酵解和脂肪分解）。β-受体激动剂的全称为肾上腺素β受体激动剂，可分为非选择性的β-受体激动剂（如异丙肾上腺素）、选择性心脏β1-受体激动剂（如多巴酚丁胺）与选择性β2-受体激动剂（如沙丁胺醇）三大类。
一些β2-受体激动剂可以促进动物体内蛋白质合成，加速脂肪的转化和分解。因此，常被不法分子添加入饲料中以提高瘦肉率，俗称“瘦肉精”。当人食用了瘦肉精含量过多的肉类时，会产生异常生理反应的中毒现象。因此，对动物源性食品及其他食品中的β-受体进行含量检测是很有必要的。
本次实验参考《GB 31658.22-2022 食品安全国家标准 动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，使用RD-Phenyl 3 μm 2.1×100 mm色谱柱测定猪肉、牛肉与猪肝中β-受体激动剂的残留量。
1.溶液配制
（1）乙酸铵溶液(0.2 moL/L)：称取15.4 g乙酸铵（精确至0.001 g），加水溶解并定容至1000 mL，用乙酸调pH至5.2。
（2）高氯酸溶液(0.1 moL/L)：移取高氯酸8.7mL，用水稀释至1000 mL。
（3）氢氧化钠溶液(10 moL/L)：称取40 g氢氧化钠，用适量水溶解，冷却后，用水稀释至1000 mL。
（4）2%甲酸水溶液：移取甲酸2 mL，用水稀释定容至100 mL。
（5）5%氨化甲醇溶液：移取5 mL氨水置于100 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。
（6）0.1%甲酸乙腈溶液：移取甲酸2 mL，用乙腈稀释定容至100 mL。
（7）0.1%甲酸溶液：移取甲酸2 mL，用乙腈稀释定容至100 mL。
（8）甲醇-0.1%甲酸溶液(10+90，V/V)：移取甲醇10 mL和0.1%甲酸溶液90 mL，混匀。
（9）混合标准工作液(10 mg/L)：精确移取100 μL 1 mg/mL的混合标准储备液至10 mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，-18 ℃保存6个月。
（10）混合内标工作液(10 mg/L)：精确移取100 μL 1 mg/mL的混合内标储备液至10 mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，-18 ℃保存6个月。
2.酶解与提取
称取称取试样2 g(准确至0.05 g)于50 mL离心管内，加0.22 mol/L乙酸铵缓冲溶液6 mL，β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶40 μL，涡旋混匀，37 ℃避光水浴震荡16 h，放置至室温，备用。
3.萃取、净化与浓缩
取备用液，加100 ng/mL内标工作液100 μL，涡旋混匀，8000 r/min离心8 min，取上清液加0.1 mol/L高氯酸溶液5 mL，涡旋混匀，用高氯酸调pH至1.0±0.2，8000 r/min离心8 min后，将上清液用每升10mol/L氢氧化钠溶液调pH至10±0.5。加乙酸乙酯15 mL，中速振荡5 min，5000 r/min离心5 min，取上层有机相，下层水相中加入叔丁基甲醚10 mL，中速振荡5 min，5000 r/min离心5 min，取上层有机相，合并，50 ℃下氮气吹干，用2%甲酸溶液5 mL溶解，备用。
4.净化
SPE柱：MCX 60 mg/3 mL
活化：3 mL甲醇，3 mL 2%甲酸溶液，弃去；
上样：将备用液加入柱中；
淋洗：用3 mL 2%甲酸溶液，3 mL甲醇弃去，抽干；
洗脱：3 mL 5%氨化甲醇洗脱，收集于15 mL离心管中；
浓缩：将收集液在50℃氮气吹干
复溶：甲醇-0.1%甲酸溶液（10+90，V/V)0.5 mL 复溶，过0.22 μm微孔滤膜，HPLC-MS/MS检测
5.加标
加标水平：0.01 mL 0.1 ppm混标加到2 g样品，加标水平为0.5 μg/kg，最终机度数为 2 ng/mL 。
加标水平：0.025 mL 0.1 ppm混标加到2 g样品，加标水平为1.25 μg/kg，最终机度数为5 ng/mL 。
加标水平：0.02 mL 1 ppm混标加到2 g样品，加标水平为10 μg/kg，最终机度数为 40 ng/mL 。
6.色谱条件
（1） UPLC条件
色谱柱：RD-Phenyl 3 μm 2.1×100 mm
流动相：A—0.1%甲酸水溶液 B—0.1%甲酸乙腈溶液
柱温：30 ℃；
流速：0.3 mL/min；
进样体积：2 µL
梯度洗脱程序：见表1
表1 UPLC梯度洗脱程序
（2）质谱条件
离子源：电喷雾离子源（ESI）；
扫描方式：正离子扫描；
检测方式：多反应监测（MRM）模式；
离子喷雾电压：5500 V；
离子源温度：500 ℃；
气帘气（CUR）：10 psi；
雾化气（GS1）：55 psi；
辅助气（GS2）：50 psi。
液质仪器型号：AB Sciex TRIPLE QUAD 4500
其他质谱参数见表2
表2 多反应监测模式（MRM）参数
7.结果
图 1 β-受体激动剂标准品2 ng/mL图谱
图 2 β-受体激动剂标准品5 ng/mL图谱
图 3 β-受体激动剂标准品50 ng/mL图谱
图 4 猪肉样图谱
图 5 猪肉样加标0.5 μg/kg 图谱
图 6 猪肉样加标1.25 μg/kg 图谱
图 7 猪肉样加标10 μg/kg 图谱
图 8 牛肉样图谱
图 9 牛肉样加标0.5 μg/kg 图谱
图 10 牛肉样加标1.25 μg/kg 图谱
图 11 牛肉样加标10 μg/kg 图谱
图 12 猪肝样图谱
图 13 猪肝样加标0.5 μg/kg 图谱
图 14 猪肝样加标1.25 μg/kg 图谱
图 15 猪肝样加标10 μg/kg 图谱
表 3 加标回收率表
8.产品信息
RD-Phenyl
采用独特的键合技术在硅胶上键合苯基而成的色谱柱。该色谱柱具有高的表面覆盖率和完全双封尾的特性，与直链烷烃键合而成的反相色谱柱相比，苯基柱具有不同的选择性，或者可以说是互补的选择性，对芳香族化合物、极性化合物和难以分离的药物具有优良的分离效果。
订货信息：
SPE-MCX
混合型阳离子（MCX）交换固相萃取小柱，对碱性化合物具有高的选择性和灵敏度，基质基质为聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物。基质指标：离子交换和反相，而且保留作用发生在一种洁净、稳定、高表面积、pH 0-14范围内稳定的有机共聚物上。可用来分离塑料制品，食品或生物基质（如血浆，尿液,胆汁及组织匀浆）中的碱性化合物，如苯丙胺，奶粉及扑尔敏，苯环利定等。
订货信息：
中谱科技
中谱简介
中谱科技是一家集国内外色谱和生物磁珠领域优质资源和技术力量，拥有自主知识产权、具备自主创新研发团队和科研基地、生产和销售为一体的色谱和生物磁珠产品和技术服务型的国家高新技术企业。
我们具备独立研发、生产及检测能力的样品前处理、液相及气相色谱柱、制备纯化等品类齐全的色谱分离材料产品线，同时拥有开发和生产销售特异性标记与捕获，蛋白快速分离与纯化，核酸提取与文库构建，及高通量、自动化生物样本处理综合磁技术平台产品包括磁性纳米颗粒、介孔纳米材料、磁性微球等，为分子诊断、免疫化学发光、医学影像诊断的磁共振造影、细胞及生物分子的标记以及蛋白和细胞分离纯化、生物分子和药物装载等领域提供新型、高效的产品和解决方案。
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